Эту среду с добавлением мочевины рекомендуют для определения продукции уреазы, в частности, у протеев. Она рекомендована международным комитетом (ISO 6579: 1993).
Состав**:
|
Ингредиенты
|
М112 грамм/литр
|
М112I грамм/литр
|
|
Пептический перевар животной ткани
|
1,00
|
1,00
|
|
Глюкоза
|
1,00
|
1,00
|
|
Натрия хлорид
|
5,00
|
5,00
|
|
Натрия гидрофосфат
|
1,20
|
–
|
|
Калия дигидрофосфат
|
0,80
|
2,00
|
|
Феноловый красный
|
0,012
|
0,012
|
|
Агар-агар
|
15,00
|
15,00
|
|
Конечное значение рН (при 25°С) 6,8 ± 0,2
|
|
|
** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам.
Культуральные свойства:
Ростовые характеристики референс-штаммов через 18-24 ч при 35°С.
|
Штаммы микроорганизмов (АТСС)
|
Рост на среде без крови
|
Уреаза
|
|
Enterobacter aerogenes (13048)
|
Обильный
|
–
|
|
Escherichia coli (25922)
|
Обильный
|
–
|
|
Proteus vulgaris (13315)
|
Обильный
|
+
|
|
Salmonella typhimurium (14028)
|
Обильный
|
–
|
Примечание: "+" - положительная реакция, розово-красный цвет; "–" - отрицательная реакция, цвет не изменен.
Приготовление:
Размешать 24,0 г порошка в 950 мл дистиллированной воды. Прокипятить для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при 0,7 атм (115°С) в течение 20 мин. Остудить до 50 °С и асептично добавить 50 мл 40%-ного стерильного раствора мочевины (FD048). Тщательно перемешать, разлить в стерильные пробирки и остудить их в наклонном положении для получения скоса. Поскольку мочевина легко разрушается, не допускать перегревания и повторного нагрева среды.
Принцип и оценка результата:
Эта среда готовится в соответствии с прописью Кристенсена (1, 2). Для более быстрого выявления уреазы специалисты международного комитета (ISO) рекомендовали использовать один фосфат вместо двух. Первоначально среду для выявления уреазной активности предложили Rustigian и Stuart, но на ней отличались по росту протеи, которые быстро проявляют уреазную активность, и другие уреазоположительные (цитробактеры, энтеробактеры, клебсиеллы и не относимые к энтеробактериям микроорганизмы). Кристенсен отметил, что внесение в среду пептического перевара животной ткани, глюкозы и сниженного количества буфера способствует получению быстрого обильного роста микроорганизмов.
На поверхность косячков обильно засевают испытуемые культуры. При расщеплении мочевины образуется аммиак, который защелачивает среду, что сопровождается изменением цвета индикатора фенолового красного на розово-красный. Поскольку при длительном инкубировании может произойти защелачивание среды за счет образующихся из пептона аминов, для контроля рекомендуется засевать среду без мочевины.
Контроль качества:
Внешний вид порошка:
Гомогенный сыпучий порошок светло-розового цвета.
Плотность готовой среды:
Образуется среда, соответствующая по плотности 1,5%-ному агаровому гелю.
Цвет и прозрачность готовой среды:
Среда имеет желтовато-оранжевую окраску, прозрачна, если в пробирках формируется скошенный гель.
Кислотность среды:
При 25°С водный раствор (2,4% вес/об) имеет рН 6,8 ± 0,2.
Условия и сроки хранения:
Порошок хранить при температуре ниже +25 °С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8 °С.
